Javascript imezimwa kwa sasa kwenye kivinjari chako.Wakati javascript imezimwa, baadhi ya vipengele vya tovuti hii havitafanya kazi.
Javier Fidalgo, * Pierre-Antoine Deglesne, * Rodrigo Arroyo, * Lilian Sepúlveda, * Evgeniya Ranneva, Philippe Deprez Idara ya Sayansi, Skin Tech Pharma Group, Castello D'Empúries, Catalonia, Hispania * Waandishi hawa wana maarifa fulani kuhusu kazi hii Sawa usuli wa mchango: Asidi ya Hyaluronic (HA) ni polisakaridi inayotokea kiasili inayotumika katika utengenezaji wa vichungio vya ngozi kwa madhumuni ya urembo.Kwa kuwa ina nusu ya maisha ya siku kadhaa katika tishu za binadamu, vichungi vya ngozi vya HA-msingi hubadilishwa kemikali ili kupanua maisha yao katika mwili.Marekebisho ya kawaida katika vijazaji vyenye msingi wa HA ni matumizi ya 1,4-butanediol diglycidyl etha (BDDE) kama wakala wa kuunganisha kuunganisha minyororo ya HA.BDDE iliyobaki au ambayo haijashughulikiwa inachukuliwa kuwa isiyo na sumu kwa
Inapotumiwa kama kichungi cha ngozi, kizuizi kikuu cha HA ni ubadilishanaji wake wa haraka ndani ya tishu kutokana na uwepo wa familia maalum ya vimeng'enya vinavyoitwa hyaluronidases.Hadi sasa, marekebisho kadhaa ya kemikali katika muundo wa HA yameelezwa kuongeza nusu ya maisha ya HA katika tishu.3 Mengi ya marekebisho haya yanajaribu kupunguza ufikiaji wa hyaluronidase kwa polima za polysaccharide kwa minyororo ya HA inayounganisha msalaba.Kwa hiyo, kutokana na kuundwa kwa madaraja na vifungo vya intermolecular covalent kati ya muundo wa HA na wakala wa kuunganisha msalaba, HA hydrogel inayounganishwa na msalaba hutoa bidhaa nyingi za uharibifu wa kupambana na enzyme kuliko HA asilia.4-6
Kufikia sasa, kemikali za kuunganisha mawakala zinazotumiwa kuzalisha HA iliyounganishwa ni pamoja na methacrylamide, 7 hidrazidi, 8 carbodiimide, 9 divinyl sulfone, 1,4-butanediol diglycidyl etha (BDDE) Na poly(ethilini glikoli) diglycidyl etha.10 ,11 BDDE kwa sasa ndiye wakala wa uunganishaji unaotumika sana.Ingawa aina hizi za hidrojeni zimethibitishwa kuwa salama kwa miongo kadhaa, viunganishi vinavyotumika ni vitendanishi tendaji ambavyo vinaweza kuwa cytotoxic na, wakati mwingine, mutagenic.12 Kwa hiyo, maudhui yao ya mabaki katika hydrogel ya mwisho lazima iwe juu.BDDE inachukuliwa kuwa salama wakati mkusanyiko wa mabaki ni chini ya sehemu 2 kwa milioni (ppm).4
Kuna mbinu kadhaa za kugundua ukolezi wa mabaki ya chini ya BDDE, kiwango cha uunganishaji mtambuka na nafasi ya kubadilisha katika hidrojeni HA, kama vile kromatografia ya gesi, kromatografia ya kutengwa kwa ukubwa pamoja na spectrometry (MS), mbinu za kipimo cha mwanga wa sumaku ya nyuklia (NMR) na Safu ya diode pamoja na kromatografia kioevu ya utendaji wa juu (HPLC).13-17 Utafiti huu unaelezea ugunduzi na sifa za bidhaa-kwa-bidhaa katika hydrogel ya mwisho iliyounganishwa na msalaba inayozalishwa na mmenyuko wa BDDE na HA chini ya hali ya alkali.HPLC na kiowevu cha kromatografia-mass spectrometry (uchambuzi wa LC-MS).Kwa kuwa sumu ya bidhaa hii ndogo ya BDDE haijulikani, tunapendekeza kwamba uhesabuji wa mabaki yake ubainishwe kwa njia sawa na njia inayofanywa kwa kawaida kwenye BDDE katika bidhaa ya mwisho.
Chumvi ya sodiamu iliyopatikana ya HA (Shiseido Co., Ltd., Tokyo, Japan) ina uzito wa molekuli ya ~ 1,368,000 Da (njia ya Laurent) 18 na mnato wa ndani wa 2.20 m3/kg.Kwa majibu ya kuunganisha, BDDE (≥95%) ilinunuliwa kutoka Sigma-Aldrich Co. (St. Louis, MO, USA).Phosphate iliyoachwa na chumvi yenye pH 7.4 ilinunuliwa kutoka Kampuni ya Sigma-Aldrich.Vimumunyisho vyote, asetonitrili na maji vilivyotumika katika uchanganuzi wa LC-MS vilinunuliwa kutoka kwa ubora wa daraja la HPLC.Asidi ya fomu (98%) inanunuliwa kama daraja la reagent.
Majaribio yote yalifanywa kwenye mfumo wa Upataji wa UPLC (Waters, Milford, MA, USA) na kuunganishwa kwa API 3000 ya kipimo cha quadrupole mass spectrometer kilicho na chanzo cha ioni ya elektrospray (AB SCIEX, Framingham, MA, USA).
Mchanganyiko wa hidrojeni za HA zilizounganishwa na msalaba ulianzishwa kwa kuongeza 198 mg ya BDDE kwa 10% (w/w) suluhisho la sodium hyaluronate (NaHA) mbele ya 1% ya alkali (hidroksidi ya sodiamu, NaOH).Mkusanyiko wa mwisho wa BDDE katika mchanganyiko wa majibu ulikuwa 9.9 mg/mL (0.049 mM).Kisha, mchanganyiko wa majibu ulichanganywa kabisa na kurekebishwa na kuruhusiwa kuendelea kwa 45 ° C kwa saa 4.19 pH ya athari hudumishwa kwa ~12.
Baada ya hapo, mchanganyiko wa majibu ulioshwa na maji, na hidrojeni ya mwisho ya HA-BDDE ilichujwa na kupunguzwa kwa bafa ya PBS ili kufikia mkusanyiko wa HA wa 10 hadi 25 mg/mL, na pH ya mwisho ya 7.4.Ili kuzuia hidrojeni za HA zilizounganishwa na msalaba zinazozalishwa, hidrojeni hizi zote huwekwa otomatiki (120 ° C kwa dakika 20).Hydrogel iliyosafishwa ya BDDE-HA imehifadhiwa kwa 4 ° C hadi uchambuzi.
Ili kuchanganua BDDE iliyopo katika bidhaa ya HA iliyounganishwa, sampuli ya miligramu 240 ilipimwa na kuletwa kwenye shimo la katikati (Microcon®; Merck Millipore, Billerica, MA, USA; ujazo wa 0.5 mL) na kuwekwa katikati kwa 10,000 rpm kwenye joto la kawaida. Dakika 10.Jumla ya 20 µL ya kioevu cha kuvuta chini ilikusanywa na kuchambuliwa.
Ili kuchanganua kiwango cha BDDE (Sigma-Aldrich Co) chini ya hali ya alkali (1%, 0.1% na 0.01% NaOH), ikiwa masharti yafuatayo yametimizwa, sampuli ya kioevu ni 1:10, 1:100, au hadi 1:1,000,000 Ikihitajika, tumia maji yaliyotolewa ya MilliQ kwa uchanganuzi.
Kwa nyenzo za kuanzia zinazotumika katika mmenyuko wa kuunganisha mtambuka (HA 2%, H2O, 1% NaOH, na 0.049 mm BDDE), mL 1 ya kila sampuli iliyotayarishwa kutoka kwa nyenzo hizi ilichambuliwa kwa kutumia hali sawa za uchanganuzi.
Ili kubainisha umahususi wa vilele vinavyoonekana kwenye ramani ya ayoni, 10 µL ya 100 ppb BDDE ufumbuzi wa kawaida (Sigma-Aldrich Co) iliongezwa kwenye sampuli ya 20 µL.Katika kesi hii, mkusanyiko wa mwisho wa kiwango katika kila sampuli ni 37 ppb.
Kwanza, tayarisha suluhisho la hisa la BDDE na mkusanyiko wa 11,000 mg/L (11,000 ppm) kwa kuzimua 10 μL ya BDDE ya kawaida (Sigma-Aldrich Co) na 990 μL MilliQ maji (wiani 1.1 g/mL).Tumia suluhisho hili kuandaa 110 µg/L (110 ppb) BDDE ufumbuzi kama dilution ya kati ya wastani.Kisha, tumia kiyeyushaji cha wastani cha BDDE (110 ppb) kuandaa mkunjo wa kawaida kwa kupunguza kiyeyusho cha kati mara kadhaa ili kufikia mkusanyiko unaohitajika wa 75, 50, 25, 10, na 1 ppb.Kama inavyoonyeshwa kwenye Mchoro wa 1, imebainika kuwa curve ya kawaida ya BDDE kutoka 1.1 hadi 110 ppb ina mstari mzuri (R2>0.99).Curve ya kawaida ilirudiwa katika majaribio manne huru.
Mchoro wa 1 BDDE curve ya urekebishaji wa kawaida iliyopatikana kwa uchambuzi wa LC-MS, ambapo uwiano mzuri huzingatiwa (R2>0.99).
Vifupisho: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl ether;LC-MS, kromatografia ya kioevu na spectrometry ya wingi.
Ili kutambua na kupima viwango vya BDDE vilivyopo katika HA iliyounganishwa msalaba na viwango vya BDDE katika suluhisho la msingi, uchambuzi wa LC-MS ulitumiwa.
Utengano wa kromatografia ulipatikana kwenye safu wima ya LUNA 2.5 µm C18(2)-HST (50×2.0 mm2; Phenomenex, Torrance, CA, USA) na kuwekwa kwenye halijoto ya kawaida (25°C) wakati wa uchanganuzi.Awamu ya simu ina acetonitrile (solvent A) na maji (solvent B) yenye 0.1% ya asidi ya fomu.Awamu ya rununu imechanganuliwa na mabadiliko ya gradient.Upinde rangi ni kama ifuatavyo: dakika 0, 2% A;Dakika 1, 2% A;dakika 6, 98% A;dakika 7, 98% A;Dakika 7.1, 2% A;Dakika 10 , 2% A. Muda wa kukimbia ni dakika 10 na ujazo wa sindano ni 20 µL.Muda wa kubaki wa BDDE ni kama dakika 3.48 (kuanzia dakika 3.43 hadi 4.14 kulingana na majaribio).Awamu ya rununu ilisukumwa kwa kasi ya mtiririko wa 0.25 mL/min kwa uchanganuzi wa LC-MS.
Kwa uchanganuzi wa BDDE na ukadiriaji wa MS, mfumo wa UPLC (Waters) umeunganishwa na API 3000 ya spektrometa ya quadrupole mass API 3000 (AB SCIEX) iliyo na chanzo cha ioni ya electrospray, na uchambuzi unafanywa katika hali ya ioni chanya (ESI+).
Kulingana na uchanganuzi wa vipande vya ioni uliofanywa kwenye BDDE, kipande chenye nguvu ya juu zaidi kiliamuliwa kuwa kipande kinacholingana na 129.1 Da (Mchoro 6).Kwa hiyo, katika hali ya ufuatiliaji wa ion nyingi (MIM) kwa quantification, ubadilishaji wa wingi (uwiano wa molekuli-to-charge [m/z]) wa BDDE ni 203.3/129.1 Da.Pia hutumia hali ya uchanganuzi kamili (FS) na modi ya ion ya bidhaa (PIS) kwa uchanganuzi wa LC-MS.
Ili kuthibitisha umaalum wa mbinu, sampuli tupu (awamu ya kwanza ya rununu) ilichanganuliwa.Hakuna ishara iliyogunduliwa katika sampuli tupu na ubadilishaji wa wingi wa 203.3/129.1 Da.Kuhusu kurudiwa kwa jaribio, sindano 10 za kawaida za 55 ppb (katikati ya curve ya calibration) zilichambuliwa, na kusababisha kupotoka kwa kiwango cha mabaki (RSD) <5% (data haijaonyeshwa).
Maudhui yaliyosalia ya BDDE yalibainishwa katika hidrojeni nane tofauti za BDDE zilizounganishwa kiotomatiki, zinazolingana na majaribio manne huru.Kama ilivyofafanuliwa katika sehemu ya "Nyenzo na Mbinu", ukadiriaji unatathminiwa na thamani ya wastani ya mkunjo wa urekebishaji wa dilution ya kawaida ya BDDE, ambayo inalingana na kilele cha kipekee kilichogunduliwa katika mpito wa wingi wa BDDE wa 203.3/129.1 Da, ukiwa na uhifadhi muda wa dakika 3.43 hadi 4.14 Bila kusubiri.Kielelezo cha 2 kinaonyesha mfano wa kromatogramu ya kiwango cha marejeleo cha 10 ppb BDDE.Jedwali la 1 linatoa muhtasari wa mabaki ya maudhui ya BDDE ya hidrojeni nane tofauti.Kiwango cha thamani ni 1 hadi 2.46 ppb.Kwa hivyo, mkusanyiko wa mabaki wa BDDE katika sampuli unakubalika kwa matumizi ya binadamu (<2 ppm).
Kielelezo cha 2 kromatogramu ya Ion ya 10 ppb kiwango cha marejeleo cha BDDE (Sigma-Aldrich Co), mpito wa MS (m/z) uliopatikana kwa uchanganuzi wa LC-MS wa 203.30/129.10 Da (katika hali chanya ya MRM).
Vifupisho: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl ether;LC-MS, chromatography ya kioevu na spectrometry ya molekuli;MRM, ufuatiliaji wa athari nyingi;MS, wingi;m/z, uwiano wa wingi-kwa-chaji.
Kumbuka: Sampuli 1-8 ni hidrojeni za HA zilizounganishwa kiotomatiki za BDDE.Kiasi kilichobaki cha BDDE katika hidrojeni na kilele cha muda wa kuhifadhi BDDE pia kinaripotiwa.Hatimaye, kuwepo kwa vilele vipya na nyakati tofauti za kubaki pia kunaripotiwa.
Vifupisho: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl ether;HA, asidi ya hyaluronic;MRM, ufuatiliaji wa athari nyingi;tR, muda wa kuhifadhi;LC-MS, chromatography ya kioevu na spectrometry ya molekuli;RRT, wakati uliobaki wa jamaa.
Jambo la kushangaza ni kwamba uchanganuzi wa kromatogramu ya ioni ya LC-MS ulionyesha kuwa kulingana na sampuli zote za HA hidrojeli zilizounganishwa kiotomatiki zilizochambuliwa, kulikuwa na kilele cha ziada katika muda mfupi wa kubaki wa dakika 2.73 hadi 3.29.Kwa mfano, Mchoro wa 3 unaonyesha kromatogramu ya ioni ya sampuli ya HA iliyounganishwa kwa njia tofauti, ambapo kilele cha ziada kinaonekana kwa muda tofauti wa kubaki wa takriban dakika 2.71.Muda uliozingatiwa wa kubakiza (RRT) kati ya kilele kipya na kilele kutoka BDDE ilipatikana kuwa 0.79 (Jedwali 1).Kwa kuwa tunajua kwamba kilele kipya kinachozingatiwa hakijahifadhiwa katika safu wima ya C18 inayotumiwa katika uchanganuzi wa LC-MS, kilele kipya kinaweza kuendana na kiwanja cha polar zaidi kuliko BDDE.
Kielelezo cha 3 Kromatogram ya Ioni ya sampuli ya HA hidrojeli iliyounganishwa na msalaba iliyopatikana na LC-MS (uongofu wa wingi wa MRM 203.3/129.0 Da).
Vifupisho: HA, asidi ya hyaluronic;LC-MS, chromatography ya kioevu na spectrometry ya molekuli;MRM, ufuatiliaji wa athari nyingi;RRT, wakati wa kuhifadhi jamaa;tR, muda wa kuhifadhi.
Ili kuondoa uwezekano kwamba vilele vipya vilivyozingatiwa vinaweza kuwa vichafuzi vilivyopo kwenye malighafi iliyotumiwa, malighafi hizi pia zilichambuliwa kwa kutumia njia ile ile ya uchanganuzi wa LC-MS.Nyenzo za kuanzia zilizochanganuliwa ni pamoja na maji, 2% NaHA katika maji, 1% NaOH katika maji, na BDDE katika mkusanyiko sawa unaotumiwa katika mmenyuko wa kuunganisha msalaba.Chromatogram ya ion ya nyenzo ya kuanzia iliyotumiwa haikuonyesha kiwanja chochote au kilele, na muda wa uhifadhi wake unalingana na kilele kipya kilichozingatiwa.Ukweli huu unatupilia mbali wazo kwamba sio tu nyenzo za kuanzia zinaweza kuwa na misombo yoyote au vitu ambavyo vinaweza kuingilia kati utaratibu wa uchambuzi, lakini hakuna ishara ya uwezekano wa kuambukizwa na bidhaa zingine za maabara.Thamani za ukolezi zilizopatikana baada ya uchanganuzi wa LC-MS wa BDDE na vilele vipya zinaonyeshwa kwenye Jedwali 2 (sampuli 1-4) na kromatogramu ya ioni kwenye Mchoro 4.
Kumbuka: Sampuli 1-4 zinalingana na malighafi inayotumika kutengeneza hidrojeni za HA zilizounganishwa kiotomatiki za BDDE.Sampuli hizi hazijawekwa kiotomatiki.
Vifupisho: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl ether;HA, asidi ya hyaluronic;LC-MS, chromatography ya kioevu na spectrometry ya molekuli;MRM, ufuatiliaji wa athari nyingi.
Kielelezo cha 4 kinalingana na chromatogram ya LC-MS ya sampuli ya malighafi inayotumiwa katika mmenyuko wa kuunganisha msalaba wa HA na BDDE.
Kumbuka: Hizi zote hupimwa kwa mkusanyiko na uwiano sawa unaotumiwa kutekeleza majibu ya kuunganisha.Nambari za malighafi zilizochambuliwa na kromatogramu zinalingana na: (1) maji, (2) 2% mmumunyo wa maji wa HA, (3) 1% mmumunyo wa maji wa NaOH.Uchambuzi wa LC-MS unafanywa kwa ubadilishaji wa wingi wa 203.30/129.10 Da (katika hali nzuri ya MRM).
Vifupisho: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl ether;HA, asidi ya hyaluronic;LC-MS, chromatography ya kioevu na spectrometry ya molekuli;MRM, ufuatiliaji wa athari nyingi.
Masharti ambayo yalisababisha kuundwa kwa vilele vipya vilichunguzwa.Ili kujifunza jinsi hali ya athari inayotumiwa kuzalisha HA hydrogel iliyounganishwa na msalaba huathiri utendakazi wa wakala wa kuunganisha msalaba wa BDDE, na kusababisha kuundwa kwa kilele kipya (bidhaa zinazowezekana), vipimo tofauti vilifanywa.Katika maamuzi haya, tulisoma na kuchanganua kiunganishi cha mwisho cha BDDE, ambacho kilitibiwa kwa viwango tofauti vya NaOH (0%, 1%, 0.1%, na 0.01%) kwa njia ya maji, ikifuatiwa na au bila autoclaving.Utaratibu wa bakteria wa kuiga hali sawa ni sawa na njia inayotumiwa kuzalisha HA hydrogel iliyounganishwa na msalaba.Kama ilivyoelezwa katika sehemu ya "Nyenzo na Mbinu", mpito wa wingi wa sampuli ulichambuliwa na LC-MS hadi 203.30/129.10 Da.BDDE na mkusanyiko wa kilele kipya huhesabiwa, na matokeo yanaonyeshwa katika Jedwali la 3. Hakuna kilele kipya kiligunduliwa katika sampuli ambazo hazijawekwa kiotomatiki, bila kujali uwepo wa NaOH katika suluhisho (sampuli 1-4, Jedwali. 3).Kwa sampuli za autoclaved, kilele kipya hugunduliwa tu mbele ya NaOH katika suluhisho, na uundaji wa kilele unaonekana kutegemea mkusanyiko wa NaOH katika suluhisho (sampuli 5-8, Jedwali 3) (RRT = 0.79).Mchoro wa 5 unaonyesha mfano wa kromatogramu ya ioni, inayoonyesha sampuli mbili zilizojiweka kiotomatiki kuwepo au kutokuwepo kwa NAOH.
Vifupisho: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl ether;LC-MS, chromatography ya kioevu na spectrometry ya molekuli;MRM, ufuatiliaji wa athari nyingi.
Kumbuka: Kromatogramu ya juu: Sampuli ilitibiwa kwa mmumunyo wa maji wa NaOH wa 0.1% na kujiweka kiotomatiki (120°C kwa dakika 20).Chromatogram ya chini: Sampuli haikutibiwa kwa NaOH, lakini iliwekwa kiotomatiki chini ya hali sawa.Uongofu wa wingi wa 203.30/129.10 Da (katika hali nzuri ya MRM) ulichambuliwa na LC-MS.
Vifupisho: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl ether;LC-MS, chromatography ya kioevu na spectrometry ya molekuli;MRM, ufuatiliaji wa athari nyingi.
Katika sampuli zote za autoclaved, na au bila NaOH, mkusanyiko wa BDDE ulipunguzwa sana (hadi mara 16.6) (sampuli 5-8, Jedwali 2).Kupungua kwa mkusanyiko wa BDDE kunaweza kuwa kutokana na ukweli kwamba kwa joto la juu, maji yanaweza kufanya kama msingi (nucleophile) kufungua pete ya epoksidi ya BDDE ili kuunda kiwanja cha 1,2-dioli.Ubora wa monoisotopic wa kiwanja hiki ni tofauti na ule wa BDDE na kwa hiyo hautaathirika.LC-MS iligundua mabadiliko makubwa ya 203.30/129.10 Da.
Hatimaye, majaribio haya yanaonyesha kwamba kizazi cha kilele kipya kinategemea uwepo wa BDDE, NAOH, na mchakato wa autoclaving, lakini hauna uhusiano wowote na HA.
Kilele kipya kilichopatikana kwa muda wa kubaki wa takriban dakika 2.71 kilibainishwa na LC-MS.Kwa madhumuni haya, BDDE (9.9 mg/mL) iliwekwa katika mmumunyo wa maji wa NaOH wa 1% na kujiweka kiotomatiki.Katika Jedwali la 4, sifa za kilele kipya zinalinganishwa na kilele cha kumbukumbu cha BDDE kinachojulikana (muda wa kuhifadhi takriban dakika 3.47).Kulingana na uchanganuzi wa kugawanyika kwa ioni za vilele viwili, inaweza kuhitimishwa kuwa kilele kilicho na muda wa kubaki wa dakika 2.72 kinaonyesha vipande sawa na kilele cha BDDE, lakini kwa nguvu tofauti (Mchoro 6).Kwa kilele kinacholingana na muda wa kubaki (PIS) wa dakika 2.72, kilele kikubwa zaidi kilizingatiwa baada ya kugawanyika kwa wingi wa 147 Da.Katika mkusanyiko wa BDDE (9.9 mg/mL) uliotumika katika uamuzi huu, njia tofauti za kunyonya (UV, λ=200 nm) katika wigo wa ultraviolet pia zilizingatiwa baada ya kutengana kwa kromatografia (Mchoro 7).Upeo na muda wa kuhifadhi wa dakika 2.71 bado unaonekana kwa 200 nm, wakati kilele cha BDDE hawezi kuzingatiwa katika chromatogram chini ya hali sawa.
Jedwali la 4 Matokeo ya Wahusika wa kilele kipya na muda wa kubaki wa kama dakika 2.71 na kilele cha BDDE na muda wa kubaki wa dakika 3.47
Kumbuka: Ili kupata matokeo haya, uchanganuzi wa LC-MS na HPLC (MRM na PIS) ulifanyika kwenye vilele viwili.Kwa uchambuzi wa HPLC, kugundua UV na urefu wa wimbi la nm 200 hutumiwa.
Vifupisho: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl ether;HPLC, kromatografia ya kioevu ya utendaji wa juu;LC-MS, chromatography ya kioevu na spectrometry ya molekuli;MRM, ufuatiliaji wa athari nyingi;m/z, uwiano wa wingi-kwa-chaji;PIS, skanning ya Ion ya bidhaa;mwanga wa ultraviolet, mwanga wa ultraviolet.
Kumbuka: Vipande vya molekuli hupatikana kwa uchambuzi wa LC-MS (PIS).Kromatogramu ya juu: wigo wa wingi wa vipande vya sampuli za kawaida za BDDE.Chromatogram ya chini: Wigo wa wingi wa kilele kipya umetambuliwa (RRT inayohusishwa na kilele cha BDDE ni 0.79).BDDE ilichakatwa katika suluhisho la 1% la NaOH na kuwekwa kiotomatiki.
Vifupisho: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl ether;LC-MS, chromatography ya kioevu na spectrometry ya molekuli;MRM, ufuatiliaji wa athari nyingi;PIS, skanning ya ion ya bidhaa;RRT, wakati uliobaki wa jamaa.
Mchoro wa 7 kromatogramu ya Ion ya ioni ya tangulizi ya Da 203.30, na (A) kilele kipya chenye muda wa kubaki wa dakika 2.71 na (B) utambuzi wa UV wa kilele cha kiwango cha marejeleo cha BDDE kwa dakika 3.46 katika nm 200.
Katika hidrojeni zote za HA zilizounganishwa na msalaba zinazozalishwa, ilionekana kuwa mkusanyiko wa mabaki ya BDDE baada ya quantification ya LC-MS ilikuwa <2 ppm, lakini kilele kipya kisichojulikana kilionekana katika uchambuzi.Kilele hiki kipya hakilingani na bidhaa ya kawaida ya BDDE.Bidhaa ya kawaida ya BDDE pia imepitia uchanganuzi sawa wa ubadilishaji wa ubora (ubadilishaji wa MRM 203.30/129.10 Da) katika hali chanya ya MRM.Kwa ujumla, mbinu nyingine za uchanganuzi kama vile kromatografia hutumiwa kama vipimo vya kikomo ili kugundua BDDE katika hidrojeni, lakini kiwango cha juu zaidi cha kugundua (LOD) ni cha chini kidogo kuliko 2 ppm.Kwa upande mwingine, hadi sasa, NMR na MS zimetumika kubainisha kiwango cha kuunganisha na/au urekebishaji wa HA katika vipande vya kitengo cha sukari cha bidhaa za HA zilizounganishwa.Madhumuni ya mbinu hizi haijawahi kutathmini ugunduzi wa mabaki ya BDDE katika viwango vya chini kama tunavyoelezea katika makala haya (LOD ya mbinu yetu ya LC-MS = 10 ppb).
Muda wa kutuma: Sep-01-2021